Бактериологический посев – БакпосевMicrobiological culture

Бактериологический посев – Бакпосев
Microbiological culture

Что такое бактериологический посев

Бактериологический посев (культуральное или микробиологическое исследование) – лабораторное исследование,при котором биоматериал,в котором предположительно могут находиться патогенные микроорганизмы,помещают в благоприятную для их размножения среду при определенных температурных параметрах с последующей оценкой результатов и определения чувствительности к антибактериальным препаратам.

Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) из-за высокой цены и длительного срока проведения не рекомендует применять культуральное исследование в повседневной практической практике при наличии других методов диагностики (окраска по Граму,ПЦР) и при выраженной клинической картине заболевания.

Метод ценен для определения условно-патогенной микрофлоры,определения чувствительности к антибиотикам.Постепенно в практике заменяется полимеразной цепной реакцией (ПЦР)Преимуществом культурального метода явялется относительно высокая специфичность исследования и возможность лабораторного моделирования терапевтического воздействия на микроорганизмы и учет его эффективности – т.е. то,что обычно называют антибиотикограммой.
Недостатками являются длительность исследования,высокие требования к забору материала,повышенные требования к квалификации персонала лабораторий,что ведет к значительному удорожанию стоимости исследования и удлинению сроков лечения.
Лично я скептически отношусь к проведению различных бактериологических исследований,так как в большинстве случаев проблему излечения пациента удается решить в сроки,когда результаты бактериологического исследования еще не готовы.

Какие показания к проведению бактериологического посева

В современной венерологии редко приходится прибегать к бактериологическому методу исследования.По моему мнению в России отмечается некоторое злоупотребление этим методом,связанное с коммерческим интересами лабораторий и нежеланием или незнанием врачами методов синдромной диагностики и лечения половых инфекций.
Несомненными показаниями к проведению бактериологического исследования являются два заболевания : воспалительные заболевания малого таза у женщин и простатит у мужчин.С юридической точки зрения бактериологическое подтверждение диагноза гонококковой инфекции требуется при обнаружении в мазке грамотрицательных диплококков у девочек, пожилых женщин и беременных .В некоторых случаях исследование необходимо при хроническом,торпидном уретрите у мужчин и рецидивирующем вульвовагините у женщин.

Как проводится бактериологический посев

Материал для исследования:отделяемое из очагов поражения.Материал может браться не только из половых органов,но и из полости рта,прямой кишки.Правила забора аналогичны забору при ПЦР-диагностике.Сроки выполнения различны от нескольких дней до нескольких недель(зависят от определяемого возбудителя).Для забора материала используются стерильные специальные инструменты или тампоны.Материал помещают в транспортную среду,если забор проводится вне лаборатории и в дальнейшем его помещают в специальные питательные среды.В зависимости от задач исследования применяют множество сред с добавлением различных биопрепаратов и химических соединений.Питательная среда с внесенным материалам помещается в специальные приборы(термостаты),в которых создается и автоматически поддерживаются условия,необходимые для размножения микроорганизмов (температура,влажность,газовая смесь и.т.д.).По истечению определенного времени проводят контрольные проверки-осмотры питательных среды.Рост микроорганизмов происходит в виде так называемых колоний,обладающих видимыми характеристиками – размер,плотность,форма,цвет и.т.д.При необходимости проводится микроскопическое исследования материала,взятого из колоний с окраской специальными красителями.Для того,чтобы дифференцировать микроорганизмы,сходные по типу колоний и (или) микроскопической картине проводят дополнительное исследования по способностям микроорганизмов разлагать некоторые неорганические и органические соединения – так называемое исследование с помощью биохимического ряда.Для определения количественных показателей используют различные методы,о которых сказано ниже.Выделенный и определенный микроорганизм называют культурой.
Задача упрощается в тех,случаях,когда посев материала проводят на специальные среды,на которых могут размножаться только определенные виды микробов.(например среда Маккоя для определения хламидий).

Как проводится подсчет результатов

Интерпретация результатов микробиологического исследования материалов, полученных при обследовании половых органов представляет определенные трудности,и, в значительной мере, зависит от опыта врача-лаборанта и правильности техники проведения исследования.В результате проводимого исследования определяется микроорганизм или микроорганизмы,по наличию которых можно предполагать,что он (они) являются причиной патологических изменений в мочеполовых органах.В большинстве случаев помимо качественного определения (наименования микроорганизма) проводят и количественную оценку культуры.Наиболее простым методом оценки является определения степени роста:

На плотной питательной среде рост до 10 колоний микроорганизмов определенного вида.

На плотной питательной среде рост от 10 до 100 колоний.

На плотной питательной среде рост более 100 колоний.

В случае роста условно-патогенных микроорганизмов I и II степени роста чаще всего свидетельствуют о загрязнении, III и IV степени роста – об этиологической роли данного микроорганизма в воспалительном процессе.

Что такое колониеобразующие единицы (КОЕ)

Колониеобразующая единица ( colony-forming unit -CFU) – одна живая микробная клетка, из которой вырастает колония,по другим определениям – в идимая колония микроорганизмов, выросшая из одной клетки или из группы клеток.Определение КОЕ теоретически позволяет определить концентрацию(количество) микроорганизмов в единице объема.Если определения количества микроорганизмов например в 1 мл мочи или в 1 мл спермы не вызывает возражений и может приниматься во внимание при определении тактики лечения заболевания,то количественное определение микроорганизмов в отделяемом из половых органов (влагалища,уретры) вызывает большие сомнения – так в любом случае,независимо от методов подсчета,определяется количество микроорганизмов только во взятой пробе из половых органов,а не во влагалище,цервикальном канале или уретре в целом.

Поэтому определение различных “титров”, “степеней”,
“количества” микроорганизмов в пробах,взятых из отделяемого влагалища и уретры не имеет никакого практического значения ни для диагностики мочеполовых инфекций,ни для назначения лечения,ни для контроля их излеченности.

Подсчет КОЕ проводят несколькими методами:

Метод серийный разведений

Из транспортной среды,содержащей биоматериал берется 1 мл,который последовательно разбавляется в 10 раз с посевом в пронумерованные пробирки с питательной средой.Та пробирка,в которой прекращается рост микроорганизмов считается максимальной границей количества микроорганизмов в пробе.Для примера количество концентрация микроорганизмов в нижеприведенной таблице составляет 10х 6

Бактериологический посев (бакпосев) – отзыв

Дорогой, но очень нужный анализ, который позволит назначить 100% правильное лечение при бактериальной инфекции! Об этом должен знать каждый! Результаты моих анализов как чистых, так и плохих. Антибиотикограмма.

Сегодня я расскажу вам об очень важном анализе.

Это советую знать, так как врачи нам попадаются не всегда компетентные и нужно самостоятельно хоть немного разбираться в вопросе и не стесняться задавать вопросы на приеме.

Итак, бактериологический посев (бакпосев). Что же это такое.

Бактериологический посев или, как принято называть короче – бак посев, применяется для получения большого количества микробов одного вида (чистая культура) с целью изучения их физико-химических и биологических свойств, чтобы затем полученные данные использовать для диагностики инфекционных заболеваний.

К сожалению, даже популярные нынче иммуноферментный анализ (ИФА), полимеразная цепная реакция (ПЦР) и другие методы, основным недостатком которых являются ложноположительные или ложноотрицательные результаты, не всегда могут идентифицировать возбудителя. Кроме того, они не способны подобрать антибактериальные препараты направленного действия, что может сделать бакпосев.

КАКИЕ ПОСЕВЫ БЫВАЮТ:

Бакпосевы делают всех биологических жидкостей организма (моча, кровь, сперма, грудное молоко), а также берутся соскобы из необходимых мест.

Зачастую, очень нужно знать именно возбудителя заболевания, особенно если оно хроническое или плохо поддается лечению.

Так, бакпосевы можно сдать из зева, носа, раны, зубодесенного кармана, половых органов, кожи, ресниц и прочих мест.

Лично я много раз сдавала бакпосевы по гинекологии и посевы мочи.

А мой муж сдавал посев из носа, когда лечение гайморита не давало результатов.

По гинекологии.

По гинекологии у меня были воспаления, но никаких ЗППП не находили. (Кстати, комплекс анализов на ЗППП выгодней всего выбирать Фемофлор).

Поэтому, чтобы узнать какой условный патоген вызывает повышение лейкоцитов в мазке, нужно было сдать такой посев, иначе, непонятно, что лечить и чем.

Вот как выглядят результаты исследований в разных лабораториях.

На бланке с результатом указаны выявленные бактерии, их титры, то есть, количество (КОЕ – колониеобразующие единицы) и указана чувствительность к антибиотикам.

Если же никаких колоний бактерий не выделено, то и антибиотикограмма не проводится (но стоимость одинаковая).

Как видите, у меня находили грибок.

Также, в одной из лабораторий пишут количество обнаруженных лактобактерий. Их должно быть в норме много.

По антибиотикограмме доктор назначал мне лечение.

Чем больше количество миллиметров возле названия препарата, тем больше воздействие антибиотика на бактерию – больше радиус действия капли антибиотика в посеве.

По моче.

Касательно бакпосева мочи могу сказать следующее – сдаю его часто из-за цистита, с которым борюсь много лет.

В идеале моча должна быть стерильной.

Но вот в некоторых лабораториях даже в бланке указывают, что для титров выросших бактерий меньше 10 в третьей степени они не делают антибиотикограмму, мол, это норма. Я с этим не согласна, у хроников, как я, даже низкая степень вызывает сильное обострение. А после лечения важно оценить его эффективность, ведь, если не долечиться, то скоро снова будет обострение.

Поэтому, я выбрала лабораторию, в которой подбирают антибиотик даже если прямо посев роста не дал, т.е. из скопления бактерий они вырастили нечто и подобрали. Это получается титр где-то 10 в первой степени или еще меньше.

В бланке вы можете увидеть эту надпись: прямой посев роста не дал…

КАКИЕ БАКТЕРИИ ВИДНО В ПОСЕВЕ:

В посеве видны бактерии разных типов, а также, грибы. Бактерий типа гарднерелл тут видно не будет, для таких бактерий делается отдельный посев или же ПЦР анализ. Это зависит от того, какая среда нужна для роста того или иного возбудителя. Для микоплазм и уреаплазм, также, нужен отдельный особый посев.

Вот я не знаю, для чего существует отдельный посев на кандиду, если и в обычном посеве она растет? Да и вообще, сейчас расплодилось очень много бесполезных анализов, на которые пациенты только деньги зря тратят. Например, доктор мне назначал так называемый «быстрый» посев, но вот только антибиотикограммы на бактерии, вроде кишечной палочки, в нем нет, а только на мико-уреаплазмы. В чем смысл такого анализа?

Каждому возбудителю нужна своя «родная» среда с учетом ее рН, окислительно-восстановительных потенциалов, вязкости, влажности и осмотических свойств. Среды могут быть мягкими и твердыми, простыми и сложными, универсальными и не очень, однако во всех случаях они должны обеспечивать питание, дыхание, размножение и рост бактериальной клетки.

ПОДГОТОВКА К БАКПОСЕВУ:

К сдаче любого бакпосева нужно готовиться – в лаборатории вам подскажут как.

Конечно, посевы нужно сдавать до начала лечения или уже через несколько недель после лечения.

Нужно подготовиться так, чтобы не нарушить стерильность забора материала, но при этом не повлиять на результаты – не смыть нужного и не занести ничего лишнего.

СКОЛЬКО ДЕЛАЕТСЯ ПОСЕВ:

Бакпосев любой делается около 7 дней, это дело не быстрое, так как нужно, чтобы бактерии выросли в питательной среде, а также, чтобы подобрать антибиотик.

Обычно, я сдаю посев и доктор прописывает мне лечение, которое при необходимости корректирует после получения результатов анализа.

СТОИМОСТЬ:

Ни в какой поликлинике я не видела, чтобы бактериальный посев был бесплатный, везде либо платно, либо опять же, платно нужно обращаться к частнику.

В лабораториях моего города стоимость посева варьируется от 180 до 300 гривен.

ВЫВОД:

Бакпосев – это очень важный анализ, который позволяет лечиться именно подходящим препаратом. Особенно это касается детей, беременных девушек, которым нельзя принимать что попало с надеждой, что поможет. Также, таким людям, как я, у которых уже убитый лечениями организм бакпосев крайне необходим.

Надеюсь, мой отзыв был для вас полезен!

Желаю вам и вашим близким никогда не болеть!

Бактериологическое исследование

Бактериологическое исследование – способ проверки биоматериала на наличие

возбудителя инфекционного заболевания. Метод бакпосева позволяет выявить и идентифицировать патогенный микроорганизм даже при относительно малых его концентрациях в тканях. Для этого исследуемые образцы высевают на питательные среды и культивируют для получения визуально видимых колоний возбудителя. Полученные штаммы бактерий типируют и проверяют на устойчивость к антибиотикам.

На заметку! Бактериологические методы исследования уступают по точности иммуноферментному анализу (ИФА) и полимеразной цепной реакции (ПЦР), но в отличие от них, с высокой точностью определяют степень чувствительности выделенных штаммов бактерий к группам антибиотиков. Полученный результат позволяет подобрать максимально эффективное лечение и скорректировать дозы лекарств.

Процедура занимает несколько суток (48-72 часа).

В каких случаях используют бактериологический метод

Исследование проводят для диагностики инфекционных заболеваний с хроническим (реже – острым) течением. Локализация и степень поражения может быть различной. Общие примеры:

  • ЗППП и инфекции мочевыделительной системы – хламидиоз, трихомониаз, микоплазмоз и др.;
  • кишечные инфекции – дизентерия, брюшной тиф, сальмонеллез;
  • хронические поражения органов дыхательной системы – синуситы, тонзиллиты, бронхиты, пневмонии;
  • гнойные процессы различной локализации, в том числе гнойничковые поражения кожи. В данном случае определение чувствительности микроорганизма к антибиотикам особенно актуально;
  • дисбактериоз слизистых структур – кишечника, половых органов, ротовой полости. Методика позволяет не только выявить патогенных и условно-патогенных возбудителей, но и сделать заключение о составе здоровой микрофлоры;
  • сепсис – общее заражение крови.

Последовательность действий и особенности методики

Для проведения бактериологического исследования необходимо выполнить сбор материала и культивировать его на питательных средах с последующей микроскопией полученных штаммов и проверкой чувствительности к антибиотикам.

Сбор материала

Биоматериалом для исследования могут служить кровь, моча, ликвор, мокрота, сперма, кал, мазки из глотки, влагалища, уретры, любые другие ткани и жидкости из области инфекционного процесса. Образцы собирают в асептических условиях, помещают в стерильную посуду и в течение 2-х часов доставляют в лабораторию. При необходимости пробы хранят при пониженных температурах.

Культивирование

Культивирование проводят с применением механических или биологических методов. Механический подход с использованием стандартных искусственных сред – наиболее распространенный. В данном случае для высевания образцов используют жидкие и твердые питательные составы. Наиболее распространенные – агар, мясо-пептонный бульон.

Посев материала производят с помощью специальной петли или пастеровской пипетки, растирая полученный образец по поверхности или вводя его в толщу питательной среды. Выделение бактерий производят из чистых культур, которые получают повторным посевом ранее выращенных колоний на новую среду.

Биологические методы подразумевают использование специальных питательных сред, которые учитывают особенности микроорганизма, в частности, чувствительность к некоторым химическим веществам, в том числе антибиотикам. В некоторых случаях применяют метод заражения лабораторных животных или тканевых культур с отслеживанием патологических изменений. Такой подход актуален при крайне незначительном накоплении микроба в тканях человека – в этом случае его выделение посевом на питательных средах не дает результата.

Микроскопическое исследование

Основной метод бактериологической диагностики – бактериоскопия. Она подразумевает визуальную оценку параметров микроорганизма под микроскопом. Для этого используют фиксированные и нефиксированные препараты.

Нефиксированные препараты позволяют исследовать живые образцы бактерий. Основные методы:

  • раздавленная капля – образец придавливают между предметным и покровным стеклами;
  • висячая капля – образец помещают в лунку на предметном стекле и герметично накрывают покровным.В качестве среды используют изотонический раствор или расплавленный агар. Методика позволяет наблюдать за живыми микроорганизмами в течение нескольких дней.

Фиксированные препараты используют для окрашивания с подробным изучением морфологических и некоторых биохимических параметров патогенов. Каплю бактериального состава размазывают по предметному стеклу и фиксируют пламенем горелки или специальными химическими составами.

Для определения свойств бактериальных препаратов используют ряд общих и специфических методик:

  • микроскопия – определение формы, размеров, окрашивания по Граму;
  • биохимические методы – исследование ферментативной способности микроорганизма к расщеплению тех или иных углеводов, аминокислот, метаболитов, в том числе способность к гемолизу, фибринолизу при попадании в кровь живых существ;
  • серологические методы идентификации – реакции агглютинации под воздействием специфической сыворотки и другие антигенные свойства;
  • биологические методы – заражение лабораторных ждивотных с проверкой патогенности и токсигенности взятых образцов, их устойчивости к антибиотикам.

Только совокупный анализ результатов всех методов диагностики – микроскопических, биохимических, серологических, биологических – дает объективный результат для вынесения точного диагноза.

Расшифровка результатов

Стандартный результат сводится к двум пунктам анализа:

  • качественный анализ с определением факта наличия/отсутствия определенного возбудителя;
  • количественный анализ с указанием числа микроорганизмов на единицу объема – выражают в КОЕ (колониеобразующие единицы). Чем выше этот показатель, тем сильнее бактериальное поражение организма данным возбудителем.

Внимание! Отрицательный результат является относительным и показывает отсутствие патогенных организмов лишь в отдельно взятой порции материала. Для большей объективности данных требуется повторное обследование.

Дополнительно указывают чувствительность микроорганизмов к основным классам антибактериальных средств – пенициллинам, тетрациклинам, цефалоспоринам, макролидам. Чем выше показатель чувствительности, тем успешнее будет лечение данным антибиотиком.

Оценка результатов бактериологического исследования.

При соответствии полученных результатов по тестированию выделенной культуры с вышеуказанными данными полученный бактериальный штамм определяют как бактериальную культуру вида Yersinia enterocolitica.

В случае, если изучаемая бактериальная культура не типируется как бактерии вида Yersinia enterocolitica, возможен вариант повторного использования бактериальной суспензии со средой накопления, хранящейся в холодильнике при +4°С.

Оптимальным решением является постановка на исследование не одной пробы исследуемого образца, а целой серии проб.

Общие сроки бактериологического исследования материала – в пределах 7 суток.

Идентификация вида осуществляется биохимическими и серологическими методами.

Для проведения ускоренной диагностики заболевания можно использовать чумной бактериофаг. Бактериофаг Y. pestis выделяют из различных источников, включая ткани больного человека и животных, а также блох. Многие авторы связывают естественное быстрое угасание заболевания в очаге с наличием бактериофага. Его высокая специфичность и вирулентность для чумной палочки позволяют применять его для идентификации чумы внесением в исследуемый материал перед посевом либо по увеличению титра бактериофага в среде.

Для быстрого обнаружения также применяют AT, меченные флюоресцинами (позволяют обнаружить Y. pestis в различных объектах в течение первых 2 ч исследования), реакцию нейтрализации AT, реакцию преципитации в стандартных агаровых пластинках и метод ускоренного роста Y. pestis на средах обогащения.

Также разработаны методы, ускоряющие биологическую пробу, например, введение зараженным животным глюкокортикоидов или куриного желтка, что позволяет уско­рить диагностику чумы в случаях снижения вирулентности или при применении малой заражающей дозы.

Основные биохимические свойства, дифференцирующие Y.pseudotuberculosis и Y. enterocolitica, представлены в таблицах 15 и 16. Дополнительными признаками могут служить результаты реакции Фoгеса-Проскауэра: всегда отрицательные у Y. pseudotuberculosis и положительные при 22-28°С у Y. enterocolitica. В последнее вре­мя для выделения Y.enterocolitica из фекалий предложена селективная среда, содержа­щая цефсулодин, иргазан и новобиоцин (CIN-агар).

Питательные среды для культивирования иерсиний Фосфатно-буферный раствор (фбр)

Раствор А: KH2PO4 – 9,08 г в 1,0 л дистиллированной воды; раствор Б: Na2HPO4  2H2O – 11,87 г в 1 л дистиллированной воды (pH 7,6-7,8). 150 мл раствора А соединить с 850 мл раствора Б. Разлить по 5 мл в пробирки, стерилизовать при 1 атм. в течение 1 часа.

Буферно-казеиново-дрожжевая среда (бкд)

Гидролизат казеина средней степени расщепления – 2,0 мл (Дагестанский НИИ питательных сред); экстракт пекарских дрожжей – 5,0 мл; фосфатно-буферный раствор (pH 7,6-7,8) – до общего объема 1 л. Экстракт пекарских дрожжей: к 500 г дрожжей, предварительно размельченных до гомогенной массы в фарфоровой ступке в малом объеме дистиллированной воды добавить до 1 л дистиллята. Взвесь слить в колбу и кипятить в течение 60 минут на медленном огне при помешивании. Взвесь охладить при 5°С в течение 16-18 часов. Затем надосадочную жидкость слить и профильтровать через широкопористый бумажный фильтр. Приготовленный дрожжевой экстракт разлить во флаконы, простерилизовать под давлением 0,5 атм. 30 минут; хранить при температуре 5-8°С в течение 12 месяцев.

К 0,5 л фосфатно-буферного раствора добавить 2,0 г гидролизата казеина (предворительно подготовленного согласно указаниям на этикетке) и 5,0 мл экстракта дрожжей. Смешать встряхиванием, добавить фосфатно-буферный раствор до общего объема 1 л и проверить pH готовой среды (должен быть 7,6-7,8). Далее смесь разлить в пробирки по 5,0 мл и автоклавировать под давлением 0,5 атм. в течение 20 минут. Среду можно использовать в течение 7-10 суток при хранении в условиях холодильника.

Читать еще:  Белый прыщ на сосочке у женщин
Ссылка на основную публикацию
Adblock
detector